Elevage de Drosophila Melanogaster

[Franzi 0]

Technique d'élevage de
DROSOPHILA MELANOGASTER
Proposé par Mireille JOSEPH
L'intérêt de la Drosophile en génétique (MORGAN, 1910)
La drosophile (drosophila melanogaster) est un insecte diptère plus connu sous le nom de
mouche du vinaigre.
Cette petite mouche, de 3 à 4 mm de longueur s'élève très facilement au laboratoire.
C'est un animal prolifique. Une femelle peut pondre de 200 à 300 oeufs.
Le développement est rapide. On peut obtenir une génération tous les 12, 15 jours soit 26 à 28
générations par an.
Les mutants sont facilement reconnaissables. Les caractères mutés, aisément observables,
sont soit la couleur du corps ou des yeux, soit la forme des ailes, des yeux ou des soies.
A - Principes d'élevage.
L'élevage se fait sur milieu artificiel, en flacon de verre. La vitesse de développement est en
fonction de la température.
- à 24°, il faut 12 jours de la ponte à la mue imaginale. Il faut plus de temps à moins de 24°.
Au dessus de 28° des lésions apparaissent chez les animaux et un taux anormal d'infécondité
se manifeste.
L'observation et le tri peuvent se faire sur des individus endormis à l'éther. Ceux-ci pourront
ensuite être placés dans un nouveau milieu d'élevage.
B - Milieu d'élevage
1) Flacon d'élevage
Le flacon a une forme adaptée à la nécessité de faire sortir aisément les drosophiles. Il a une
forme se rétrécissant progressivement de la base au sommet.
Le flacon comprend
· au fond un milieu nutritif solidifié
· au centre un support qui permet aux mouches de se poser en évitant l'engluement dans le
milieu nutritif (en particulier avant le réveil, après "éthérisation"). Il est formé par un morceau
de papier rugueux du type papier filtre. Il est recommandé de lui donner une forme de cornet
pour déposer les, drosophiles endormies. On veillera à ce que ce support n'obstrue pas l'accès
au milieu nutritif.
· Un bouchon qui doit laisser passer l'air. Il sera réalisé d'un morceau de coton hydrophile
enveloppé dans de la gaze hydrophile.
2) Milieu nutritif
Il assure la nutrition des animaux et constitue le milieu dans lequel se développeront les
larves. Afin d'éviter l'engluement, il doit être solide, sans cependant être trop compact pour
permettre l'évolution des larves.
- un litre de solution de culture (10 flacons) comprend
- 750 ml H2O
- 100 gr de farine de maïs
- 20 gr d'agar-agar
- 80 gr de levure de bière
- 50 ml de solution alcoolique de d'hydroxybenzoate méthyle à 10 %
3) réalisation du milieu (si possible dans un autocuiseur):
Mélanger tous les produits
Chauffer doucement en remuant jusqu'à ébullition
Laisser cuire 25 minutes à l'autocuiseur
Verser 100 ml environ dans chaque flacon
Laisser refroidir, conserver si besoin au réfrigérateur.
C - Mise en élevage
Dans chaque flacon, on mettra les couples (pas plus de 10 couples par flacon). Si les animaux
ont été endormis, il faut prendre soin de les poser sur le support en papier rugueux pour éviter
l'engluement.
Mettre les flacons à une température de 24°. (Étuve, ou chauffée par une lampe à
incandescence, de préférence à filament de carbone. De légères variations de température ne
sont pas très importantes (entre 18° et 28°), mais elles influent sur la vitesse de
développement.
On observera que les oeufs sont pondus à la surface du milieu nutritif. Au bout de quelques
jours, les larves vont se déplacer dans ce milieu. Vers le 6ème, 8ème jour, y les larves
montent le long des parois du flacon. Elles subissent la pupaison.
Note importante
Lorsque l'on réalise un croisement, il est évident que les femelles doivent être vierges. Il faut
être certain qu'aucun accouplement préalable à celui envisagé ne s'est réalisé. On mettra à
profit le fait que dans les 6 heures qui suivent la mue imaginale, la femelle ne s'accouple pas.
Il faudra donc éliminer toutes les femelles du flacon souche, puis dans les 6 heures qui suivent
prélever les femelles qui apparaissent pour effectuer le croisement souhaité.
Prélèvement, examen des Drosophiles
Dans le cas où l'on désire examiner les individus puis les remettre en élevage, il est nécessaire
de prendre des précautions. Un individu qui ,touche de l'éther meurt. Aussi on a intérêt à
utiliser un éthérisateur
Pour ne pas blesser les animaux au cours de la manipulation, il faut prendre la précaution de
ne les manipuler et les déplacer qu'avec un pinceau souple.
On reconnaîtra un individu endormi d'un individu mort car ce dernier a les ailes écartées et
non plus allongées sur le dos.
Les Drosophiles qui ont des ailes recroquevillées ne sont pas des mutants, mais des individus
qui ont été endormis peu de temps après la mue imaginale. Le durcissement cuticulaire s'est
effectué sans que l'animal ait déployé ses ailes.
Reconnaître le sexe
1- Les mâles sont un peu plus petits que les femelles.
2- L'extrémité de leur abdomen en vue dorsale est arrondie et presque noire alors que celle des femelles
est pointue et plus claire.
3- Les mâles possèdent un "peigne sexuel" situé sur les pattes antérieures.